Окраска гематоксилин—эозин (окраска гематоксилином и эозином) является одним из самых распространённых методов гистологии. Широко используется в медицинской диагностики, в частности в онкологии для окраски ткани, полученной при биопсии.
Окраска включает использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.
Таким образом, терминология базофильная и эозинофильная структура связана с аффинностью к соответствующим красителям и не связана с кислотностью среды.
Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочка аксонов нейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.
Смотреть что такое «Окраска гематоксилин—эозин» в других словарях:
Эозин Y — Общие Систематическое наименование 2 (2,4,5,7 тетрабромо 6 оксидо 3 окс … Википедия
Эозин — Y … Википедия
ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия
Кожа — У этого термина существуют и другие значения, см. Кожа (значения). О коже как материале см. Кожевенное производство, Кожаные изделия, Художественная обработка кожи. Кожа наружный покров организма позвоночных, защищающий тело от широкого… … Википедия
Радиальная глия — … Википедия
Список паразитов человека — Паразиты человека это паразиты, заражению которыми подвержен человек. Общее определение слова «паразит» касается не только многоклеточных и простейших, живущих за счёт своего хозяина и во вред последнему, но также вирусов, бактерий и грибов … Википедия
ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА — ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА. Содержание: Методика гистологич. исследований. 242 Теоретические основы Г. т. 246 Гистохимия. 253 Краски, употребляемые в Г. т. 258 Гистологическая техник а техника изучения… … Большая медицинская энциклопедия
КРАСКИ — КРАСКИ, химич. вещества, обладающие свойством окрашивать другие предметы в свой или другой цвет непосредственно или с помощью другого хим. соединения протравы. Широкое применение К., надо полагать, вызывается инстинктивным стремле нием человека к … Большая медицинская энциклопедия
Окраска ГЭ — это обязательный этап для любого гистологического исследования. По препаратам, окрашенным этим методом, можно поставить большинство гистологических диагнозов, увидеть основные структуры и составляющие исследуемого объекта.
Прежде чем окрасить препарат, нужно сначала высушить его и обезводить.
Высушивание стекла с парафиновым срезом
— выловить срез на стекло и оставить при комнатной температуре до утра
— вертикально высушить срез на стекле в термостате 60оС в течение 1 часа
— поместить для сушки в нагревательный отсек стейнера
— поместить срез в водяную баню, выловить на стекло и подогреть над пламенем спиртовки (или феном)
— горизонтально подогреть на нагревательном столике.
После того, как срез высушен, можно приступить к окраске.
Общие этапы для удаления парафина перед окраской. Депарафинирование
Депарафинирование должно осуществляться при температуре не ниже 20оС, иначе парафин очень плохо удаляется из срезов и блокирует участки, подлежащие окрашиванию.
Окраска
Гематоксилин
Бывает 2 типов: прогрессивный, который не требует последующего извлечения избытка красителя, и регрессивный, который красит избытком красителся с последующей его отмывкой.
Прогрессивный окрашивает от 3 и до 20 минут (в зависимости от длительности использования и чистоты красителя). Регрессивный до 10 сек и до 5 минут (можно дольше).
После каждого красителя применяют проточную воду 1-5-10 минут (выполняет роль подсинивающего буфера). После регрессивного гематоксилина ставится проточная вода на 1 мин, далее — дифференцирующие растворы (солянокислый спирт 0.25-1% на 70-96% этаноле или 0.25-0.5% водная соляная кислота). Количество погружений стекол в раствор устанавливается опытным путем с последующим контролем под микроскопом. После — промывка в 2 сменах проточной воды по 1 минуте в каждой, затем третья смена проточной воды от 3 мин и более, до того, как все ядра клеток станут синими.
Необходимо фильтровать любой гематоксилин после работы и доливать до уровня свежим.
Подсинивание можно выполнять с помощью подсинивающих растворов.
— промывочный буфер для ИГХ (PBST или TBST)
— мраморная крошка в проточной воде.
Менее эффективные подсинивающие агенты — раствор аммиака или пары аммиака. При обработке этими реактивами срезы могут слезть со стёкол.
Далее стекла помещают в дистиллированную или деоинзированную воду. Лучше сделать 2 смены по 2 минуты, чтобы удалить остатки подсинивающих буферов — они извлекают окраску эозином.
Окраска эозином возможна красителями, содержащими разный процент эозина на основе спирта, воды или вода+спирт (оптимальный вариант).
Время окраски эозином от 10 сек до 3 мин. После стекла переносят в дистиллированную воду для отмывки избытка эозина или в спирт, если используется спиртовой раствор красителя.
Избытокэозина можно отмыть опусканием стекла последовательно в спирт-воду-спирт до тех пор, пока не будет достигнут желаемый оттенок. При этом нужно помнить, что последующими спиртами может быть извлечено еще какое-то количество эозина. Длительность этапов отмывки определяется экспериментально и контролируется визуально под микроскопом.
Эозин, как и гематоксилин, необходимо ежедневно фильтровать, доливая до уровня свежим раствором.
Обезвоживание. После эозина идут 3-4 смены этанола или изопропанола по 2 мин каждая. Первая смена выливается через 60-8-100 стекол, или при помутнении. Остальные переставляются на одну позицию влево, так, чтобы последняя получилась свежая.
Просветление. Происходит посредством 2 смен ксилола по 1 минуте. Карбол-ксилол совершенно лишний в этом процессе при условии своевременной замены реактивов.
Протоколы окраски ГЭ
Ручной протокол
Ксилол 3 мин Ксилол 3 мин Ксилол 3 мин Этанол (ИПА) 2 мин Этанол (ИПА) 2 мин Этанол (ИПА) 2 мин
Дистиллированная вода 2 мин
Гематоксилин 3-20 мин (в зависимости от типа)
Проточная вода 2 мин
Дифференцирующий раствор 10 сек — 1 мин (для регрессивного; время зависит от типа раствора)
Проточная вода 3-5 мин или подсинивающий раствор (можно дольше — до синих ядер)
Дистиллированная вода 2 смены по 2 мин
Эозин 10 сек — 3мин
Дистиллированная вода 1 минута или дольше
Этанол (ИПА) 3 мин Этанол (ИПА) 3 мин Этанол (ИПА) 3 мин Этанол (ИПА) 3 мин Ксилол 1 минута Ксилол 1 минута (или дольше, если необходимо).
Общее время процесса: 44 мин — 60 мин.
Для окраски в стейнерах протокол может быть похожим, но не каждый стейнер имеет столько станций для реагентов. Иногда полностью соблюсти вышеописанный протокол не представляется возможным, поэтому приходится жертвовать этапами с дистиллированной водой и дифференцировкой, а также сокращать этапы с этанолом и ксилолом. В этом случае необходимо чаще менять ксилолы и спирты, а также красители, т.к. увеличивается их расход, что, кстати, влияет на себестоимость исследования.
Очень желательно на рабочем месте для окраски иметь работоспособный микроскоп с малым увеличением (10х).
Контролируйте вашу окраску перед подачей стекол патологам!
Применение гематоксилина в микроскопической технике
Микроскопическая техника Гистологическая техника Гематоксилин Обзорные окрашивания Методы окраски тканей Окрашивание нервной ткани Окрашивание костной ткани Кровь: методы окраски Окрашивание азаном по методу Гейденгайна Микротом для парафиновых срезов МПС-2
Применение гематоксилина в микроскопической технике
В статье анализируется метод окраски биологических тканей с применением гематоксилина. Рассмотрены наиболее известные прописи приготовления растворов гематоксилина.
Ключевые слова: гематоксилин, гистологическая техника, методы окраски.
Свойства. Бесцветные призматические кристаллы сладкого вкуса, приобретающие под действием света, а также на воздухе красновато-желтую окраску. При 120?С препарат теряет кристаллизационную воду, а при 140?С плавится. Мало растворим в холодной воде, растворим в горячей воде (особенно в присутствии буры), этиловом спирте, глицерине, плохо растворим в диэтиловом эфире. Со щелочами дает растворы пурпурного цвета, быстро переходящий в синевато-фиолетовый, а затем в коричневый. Разбавленные кислоты на гематоксилин не действуют. Обладает свойствами кислотно-основного индикатора.
Применение. Кампешевый экстракт, содержащий гематоксилин, изначально применялся для окраски тканей в текстильной промышленности. В качестве гистологического красителя гематоксилин стал применяться с середины XIX века. Гематоксилин, введенный в микротехнику Вальдейером в 1882 году, положил начало разработке ценнейших методов окраски [7]. Первый рецепт квасцового гематоксилина был предложен Бемером в 1865 году. И в XX веке стал главным красителем, применяемый для окраски ядер клеток.
В первом отечественном руководстве по микроскопической анатомии “Основания к изучению микроскопической анатомии человека и животных” под редакцией Лавдовского М. Д. и Овсянникова Ф. В. (1887) [3, 4] гематоксилин занимал второе место после окрасок другим природным красителем – кармином. В “Основах патолого-гистологической техники” Соболева Л. В. (1910) [3,11] метод гематоксилин-эозином занимает первое место среди других. Это говорит о росте популярности методов окраски гематоксилином.
Гематоксилин сам не является красителем, но, окисляясь, превращается в красящий гематеин (Рис. 2), который в свою очередь дает различные продукты окисления, не применимые для окрашивания. Все рецепты приготовления гематоксилина для окрашивания препаратов имеют своей целью превращение гематоксилина в гематеин. Но ни гематоксилин, ни гематеин не способны давать окрашивание без протрав, с которыми они образуют солеобразные соединения – лаки. В качестве протрав используют соли алюминия, железа, меди, хрома, молибдена, ванадия.
Красящие растворы, приготовленные из гематоксилина, приобретают способность к окрашиванию лишь через некоторое время: они должны “созреть”. Под “созреванием” понимают процесс превращения гематоксилина в гематеин, которое происходит в результате окисления гематоксилина путем отдачи 2 атомов водорода. Прибавляя к растворам сильные окислители (йодноватистый калий, перманганат калия, перекись водорода), можно этот процесс значительно ускорить. Без добавления окислителей приготовленные растворы гематоксилина должны “созревать” в течение 3-4 недель с доступом яркого света и кислорода воздуха, для чего раствор с красителем оставляют на подоконнике, накрыв марлей. При использовании искусственного (ускоренного) созревания необходимо учитывать, что с увеличением количества окислителя понижается устойчивость раствора гематоксилина при длительном хранении, а при переокислении образуются высшие степени окисления, так называемые оксигематеины, которые, наконец, переходят в грязно-коричневые малоценные продукты, не обладающие красящими свойствами [7].
Механизм окрашивания биологических тканей.
Гематоксилин представляет собой краситель, имеющий слабый отрицательный заряд. При переходе в продукты окисления, гематеин и оксигематеин, отрицательный заряд возрастает. При образовании лака под влиянием таких электролитов, как железные или калийные квасцы, происходит сильная положительная перезарядка красителя. Железные и квасцовые лаки, имеющие сильный положительный заряд, красят прогрессивно. Окраска фиксированных гистологических препаратов как основными, так и кислотными красителями представляет собой процесс адсорбции, тесно связанный с электрическим зарядом ткани [7].
По Унна (1928), всякая окраска начинается как физический процесс, при котором находящийся в растворе краситель проникает в более грубые и более тонкие тканевые поры, где распределяется и накапливается по физическим законам (капиллярность, поверхностное натяжение). Эта фаза продолжается в течение нескольких минут. Вторая фаза собственно окраски представляет собой чисто химический процесс. При этом химически различные структуры преодолевают противодействующее акту окраски стремление к растворению со стороны той жидкой среды, в которой был растворен краситель. На третьей стадии, во время дифференцировки, можно с помощью более сильного растворителя модифицировать и ограничить получившиеся вначале химические соединения. Готовый препарат представляет собой новый химический индивидуум, в котором определенные сродства отдельных структур элементов связаны химически [7].
Лили Р. (1969) [5] общие методы окрашивания клеточных ядер разделяет на две основные группы: 1) методы, основанные на использовании основных (“катионных”) красителей с образованием соединений типа солей (в присутствии ДНК и РНК); 2) методы, основанные на последовательном или одновременном использовании двух- или трехвалентных ионов металлов (в качестве протравы) и красителя (чаще о-дифенолы), способного образовывать хелатный комплекс с ионом металла, который в свою очередь связывается в ткани с компонентами, обязательно кислыми по природе. Методы второй группы чаще применяют в тех случаях, когда нужно выявить ядра в материале, из которого были удалены нуклеиновые кислоты с помощью кислотной экстракции (в декальцинированной ткани). Поэтому такие протравные красители, особенно алюминиевые “лаки” (хелатные комплексы) гематоксилина, шире используются в общей гистологии, чем основные анилиновые красители.
Гематоксилин относят к группе протравных красителей. Он содержит две о-дифенильные группы. Гематоксилин в виде алюминиевых лаков широко используется для окрашивания ядер, нейтральных и кислых муцинов, а с Fe в степени окисления 3+ применяется в методах с последовательной протравой, с прогрессивной дифференцировкой лаков и в протравных прогрессивных красителях. Вместе с гематоксилином используют растворы фосфорновольфрамовой, фосфорномолибденовой и молибденовой кислот.
Обычно считают, что гематоксилин не окрашивает в отсутствие металлических протрав. Однако было показано, что гематоксилин медленно реагирует в отсутствии протрав с трихогиалином, кератогиалином, гранулами эозинофильных лейкоцитов, с некоторыми эластическими мембранами, образуя глубоко окрашенные комплексы. Комплексное соединение гематеина с металлом, называемое лаком, приобретает свойства основного красителя и способность взаимодействовать с фосфатными группами нуклеиновых кислот и другими компонентами клетки и межклеточного вещества. Цвет окрашенных структур зависит от солей металлов, выбранных в качестве протравы при различных методиках окраски.
Стандартные прописи и их применение. Особенности приготовления стандартных растворов
Существуют многочисленные способы приготовления красящих растворов из гематоксилина, хотя суть всех этих методов заключается в одном – его окислении.
Методы с железным гематоксилином
В прогрессивном методе используют кислые растворы или избыток солей железа, что позволяет избежать переокрашивания.
При регрессивной окраске рекомендуется употребление разведенных растворов, так как после применения очень концентрированных растворов последующая экстракция часто приводит к неравномерной пятнистой окраске. Так же и дифференцировка при применении разведенных растворов проходит равномернее. Толстые срезы для регрессивной окраски менее пригодны, чем тонкие, так как часто окрашиваются неравномерно [7].
Методы последовательной обработки основаны на предварительном протравливании водными растворами солей трехвалентного железа, окрашивании водными растворами гематоксилина до полного почернения среза и последующей дифференцировке кислотой или солями трехватентного железа под контролем микроскопа.
При кратковременном протравливании и применении свежеприготовленных растворов гематоксилина развивается синевато-черная окраска, а при более продолжительном протравливании в сочетании с выдержанными растворами гематоксилина дает черное или коричнево-черное окрашивание.
Железный гематоксилин Брусси[2]. Избирательно окрашивает ядра. Применяется для окрашивания тканевых культур.
Раствор А: 8 г железноаммиачных квасов растворяют в 100 мл теплой дистиллированной воды.
Раствор Б: 1 г гематоксилина растворяют в 100 мл теплой дистиллированной воды и охлаждают. Затем раствор А, постоянно взбалтывая, приливают к раствору Б. Смесь кипятят в течение приблизительно 1 минуты, быстро охлаждают и прибавляют 1%- раствор ледяной уксусной кислоты. Раствор годен к применению в течение 1-2 месяцев. Время окрашивания 0,5-1 минута, затем промывка водопроводной водой.
Результат: ядро окрашивается в синевато-черный цвет.
Железный гематоксилин Вейгерта [2, 5, 7, 8, 9]. Составляют по мере надобности из двух основных растворов. Основными являются раствор Вейгерта I и раствор Вейгерта II. Первый представляет собой 1%-раствор гематоксилина в 96%-спирте (1г гематоксилина + 100 мл 96%-спирта). Второй раствор имеет следующий состав: 4 мл раствора полуторахлористого железа (FeCl3), 1 мл концентрированной соляной кислоты, 95 мл дистиллированной воды. Перед применением смешивают оба раствора точно в равных объемах. Время окрашивания 1-2 минуты, затем промывка водопроводной водой. За указанное время срезы окрашиваются прогрессивно. Для дифференцировки применяется 0,1%-раствор солянокислого спирта, затем тщательная промывка водопроводной водой. Оба основных раствора могут сохраняться длительное время. Смешанный раствор можно применять лишь несколько дней.
Железный гематоксилин по Гейденгайну [2, 7, 8, 10]. При этом методе ткани сначала протравляют в растворе железных квасцов. В зависимости от свойств тканей они воспринимают квасцы с различной интенсивностью. При последующем действии гематоксилинового раствора образуется черный железно-гематеиновый лак, который при следующей за этим экстракцией в разной степени удерживается отдельными элементами тканей.
Готовят два раствора.
А. Протрава: готовят 3%-водный раствор железных квасцов (синонимы: железноаммиачные квасцы, сернокислый окисно-железный аммиак, ферриаммиачный сульфат). Пригодны только светло-фиолетовые кристаллы; разложившиеся буровато-желтые крошащиеся кристаллы употреблять не стоит. Кристаллы, покрытые буровато-желтым порошком, следует обмыть дистиллированной водой.
Б. Краситель: 0,5 г гематоксилина растворяют в 10мл 96%-спирта и разбавляют 90 мл дистиллированной воды. Раствор должен созревать в течение 4-5 недель при доступе воздуха. Перед употреблением его разбавляют равным количеством дистиллированной воды. После окраски раствор профильтровывают и повторно употребляют; со временем его красящие качества улучшаются.
Можно пользоваться свежеприготовленным раствором. Тогда краситель дает голубовато-серые оттенки. Чем раствор старее, тем более темные тона он дает, и препарат медленнее дифференцируется. Наконец, наиболее старые и окисленные растворы вызывают рыжий тон окраски и практически становятся непригодными.
Если в запасе нет зрелого раствора, можно с помощью NaJO3 вызвать искусственное созревание (на 0,5 г гематоксилина точно 0,1 г NaJO3).
Можно использовать следующий способ быстрого получения “созревшего” раствора гематоксилина; при кипячении растворяют 1 г гематоксилина в 95 мл дистиллированной воды, после чего добавляют 5 мл карболовой кислоты.
Для тех же целей Г.В.Эпштейн рекомендует к каждым 100 мл свежеприготовленного красителя прибавлять 1 каплю 2,5%-раствора квасцов. Раствор долго сохраняет свои красящие свойства. При появлении осадка жидкость следует фильтровать[8].
Окрашивание препаратов методом Гейденгайна.
Срезы протравляют в 3%-железных квасцах 12-24 часа.
При окраске водными красителями срезы переносят в краситель из дистиллированной воды, а при окраске спиртовыми — из соответствующего раствора спирта. После того как препарат приобретает интенсивную окраску, его промывают в воде или спирте для удаления избытка красителя (дифференцировка), контролируя этот процесс под микроскопом.
Срезы тканей после целлоидиновой и парафиновой заливки, а также полученные на замораживающем микротоме окрашивают в широкогорлых бюксах или на часовых стеклах. Одновременно окрашивают несколько срезов, промывают, дифференцируют и т.д. каждый срез отдельно.
Препараты можно помещать в красящий раствор в специальных контейнерах, предназначенных для одновременного окрашивания большого количества стекол. Если препаратов немного, то рациональнее краситель наносить непосредственно на срез по каплям с помощью пипетки. Остатки красителя можно слить в склянку и использовать повторно. Д. Кисели (1962) предлагал накрывать при этом срезы стеклянным колпаком, а для увлажнения среды оставлять под колпаком смоченную водой вату.
1. ЯДЕРНЫЕ КРАСИТЕЛИ И ИХ ПРИГОТОВЛЕНИЕ
Окрашивание ядер клеток обусловлено двумя механизмами химического взаимодействия: 1) основные красители, например анилиновые, образуют соли в присутствии ДНК и РНК; 2) образуются комплексы с ионами металлов при применении протравы. В практической работе чаще используют протравные красители. К ним относятся гематоксилин, кармин, сафранин, галлоцианин, ализарин. Хорошо окрашивают ядра такие красители, как янус зеленый, основной коричневый, оксазиновые красители (крезиловый фиолетовый, нильский голубой), тионин, азуры, метиленовый синий, основной фуксин, метиловый зеленый и др. Следует упомянуть о хороших результатах окраски ядер соком черники, которая предложена М.Д. Лавдовским еще в 1887 г.
Гематоксилин и способы его приготовления
Гематоксилин имеет растительное происхождение: его получают из эфирного экстракта кампешевого дерева. Гематоксилин хорошо растворяется в спирте и плохо в воде. Красящими свойствами обладает продукт окисления гематоксилина — гематеин, поэтому краситель становится пригодным только после созревания — окисления, на которое требуется от 10 дней до 2—3 нед. Созревание можно ускорить с помощью солей алюминия, хрома, железа и др.
Гематоксилин Эрлиха
1. Гематоксилин кристаллический 2г
3. Дистиллированная вода 100 мл
5. Алюмокалиевые или алюмоаммонийные квасцы 3г
6. Ледяная уксусная кислота 10 мл
Гематоксилин растворяют в спирте, а квасцы — в дистиллированной воде, смешивают оба раствора и затем добавляют остальные компоненты. Раствор периодически перемешивают. Через 10—14 дней он приобретает темно-вишневый цвет, что свидетельствует о готовности красителя. Продолжительность окрашивания гематоксилином Эрлиха 4—6 мин. Затем следуют промывание в дистиллированной, потом в водопроводной воде, дифференцировка в 1 % солянокислом спирте, восстановление в аммиачной воде и окончательное промывание в дистиллированной воде. Для приготовления солянокислого спирта к 100мл-70% спирта добавляют 1мл концентрированной соляной кислоты. Для приготовления аммиачной воды к 50мл дистиллированной воды добавляют 2 капли крепкого аммиака.
Гематоксилин Делафильда
1. Гематоксилин кристаллический 4гр
3. Алюмокалиевые или алюмоаммониевые квасцы 40гр
4. Дистиллированная вода 400мл
Приготовление: спирт+гематоксилин+квасцы=3-4дня на свету, перемешывая,фильтруют+100мл глицерина+100мл метилового спирта=3-4 дня на свету, фильтруют. Перед применением разбавляют в 2 раза дистиллированной водой или 2% раствором алюмокалиевых квасцов.Окрашывание 4-6 минут, промывание в дистиллированной воде, дифференцировка в солянокислом спирте, восстановление в амиачной воде, промывание в ДВ.В результате хроматин и кариолемма ярко-синие.
Выдержывают 10 суток при 25С, +440мг перманганата калия и 2,5гр тимола, перемешивают,
фильтруют. Синие ядра.
Кислый гемалаун Майера(водный)
1. Кристалический гематоксилин 1 гр
2. Алюмоамонийные квасцы 50гр
4. Йодат натрия 200мг
5. Хлоралгидрат 50гр
6. Лимонная кислота 1 гр
Продолжительность окрашивания 4—6 мин.
Результат: ядра красно-фиолетовые.
Гематоксилин Кораци (водный)
1. Гематоксилин кристаллический 0,1 г
2. Йодат калия 2—3 кристал
3. Алюмокалиевые квасцы 5 г
4. Дистиллированная вода (теплая) 100 мл
Смесь перемешивают до полного растворения и добавляют 25 мл глицерина. Раствор перед использованием фильтруют. Продолжительность окрашивания 1—2 мин. Результат: ядра ярко-синие.
Железный гематоксилин Гейденгайна
1. Гематоксилин кристаллический 1 г
3. Дистиллированная вода 90 мл
Краситель созревает 4 нед. Добавление 100 мг йодата натрия ускоряет «созревание» — он готов к использованию уже через 1 ч после приготовления. Окрашивание проводят разведенным в 2 раза раствором.
Продолжительность окрашивания 1 —36 ч.
1. Препарат помещают в 2,5 % раствор железоаммонийных квасцов на 2—12 ч.
2. Ополаскивают в дистиллированной воде.
3. Окрашивают гематоксилином Гейденгайна 1—36 ч.
4. Промывают в водопроводной воде — 3 смены по 10 мин, затем обезвоживают, просветляют, заключают.
Результат: ядра и цитоплазматические структуры черные и синевато-черные.
Железный гематоксилин Брусси
1. Гематоксилин кристаллический 1 г I
2. Дистиллированная вода при 40 «С 100 мл I
3. Железоаммонийные квасцы 8 г II
4. Дистиллированная вода при 40 «С 100 мл II
Растворы I и II смешивают, фильтруют. Продолжительность окрашивания 30 с—1 мин. Затем промывают в водопроводной воде, обезвоживают, просветляют заключают.
Результат: ядра синевато-черные.
Железный гематоксилин Вейгерта
1. Гематоксилин кристаллический 1 г А
2. Спирт 96 % 100мл А
3. Раствор трихлорида железа гексагидрата 50%-4 мл В
4. Дистиллированная вода 95 мл В
5. Концентрированная соляная кислота 1 мл В
Растворы хранят в отдельных склянках с притертыми пробками. Перед использованием нужное для окрашивания количество краски получают путем смешивания растворов А и Б в пропорции 1:1.
Продолжительность окрашивания 1—2 мин, затем промывают в водопроводной воде.
Результат: ядра черно-синие.
Другие ядерные красители
Кармин
Продолжительность окрашивания 30 мин—24 ч. Затем следует промывание в дистиллированной воде, дифференцировать в солянокислом спирте, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: ядра ярко-красные.
Сафранин
Обеспечивает получение хороших результатов после фиксации ткани в тетраоксиде осмия и особенно после применении фиксаторов, содержащих хром.
Продолжительность окрашивания 24 ч. Затем следуют промывание дистиллированной водой, дифференцировка в солянокислом спирте, дистиллированная вода, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: хроматин ядер и кариолемма ярко-красные.
Галлоцианин
Рекомендуется для окрашивания тканей, залитых в желатин.
Сначала растворяют квасцы, затем добавляют Галлоцианин, раствор кипятят при постоянном помешивании, охлаждают, фильтруют. Срок годности красителя 1 мес.
Продолжительность окрашивания 24—48 ч. Затем следуют промывание в 2 сменах дистиллированной воды, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: хроматин и тигроидное вещество синевато-черные.
Сок черники
Свежие чистые ягоды черники разминают в фарфоровой ступке, смешивают с равным объемом 96 % спирта, настаивают 1— 2 сут и фильтруют. Перед окрашиванием часть раствора разводят равным количеством 2 % водного раствора алюмокалиевых квасцов и добавляют 2—3 кристаллика тимола.
Продолжительность окрашивания 5—7 мин. Затем следуют промывание в дистиллированной воде, дифференцировка в солянокислом спирте, промывание в дистиллированной воде, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: ядра темно-фиолетовые.
2. ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИЕ КРАСИТЕЛИ
Окрашивание цитоплазмы клеток происходит в результате связывания оснований и белков кислотными красителями. В группу диффузных (кислых) красителей входят карбоновые и сульфоновые кислоты, нитро-, азокрасители и др. В гистологической практике постоянно применяют эозины, пикриновую кислоту, оранжевый Г, кислый фуксин, конго красный (конгорот), азокармин, эритрозин. Чаще используют 1 % водные растворы этих красителей, но можно применять и 1 % спиртовой раствор.
Продолжительность окрашивания колеблется от 5 с до 3—5 мин в зависимости от сорта и серии красителя. Если препарат перекрашивается, то излишек краски легко удаляется при ополаскивании в дистиллированной воде и последующем обезвоживании препарата или среза в спиртах.
Смесь кислого фуксина и пикриновой кислоты (пикрофуксин) готовят из насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 1 % водного раствора кислого фуксина (см. главу 22).
3. Методика окраски гематоксилином и эозином
Процедура окрашивания срезов, полученных на замораживающем микротоме, после парафиновой или целлоидиновой заливки различается лишь по техническим приемам, а порядок проведения окраски одинаков.
Результат: ядра синие, цитоплазма и межклеточное вещество розовые.
Практическое применение источника экспертного света «Светоч-Х» в работе медико-криминалистического отделения / Девятериков А.А., Куличкова Д.В., Шаповалова Е.С. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2019. — №18. — С. 70-73.
Апробация модификации метода цветных отпечатков с использованием тонкого целлофана вместо фотобумаги / Девятериков А.А., Нестеров А.В. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2017. — №16. — С. 18-24.
