Гамма бутиролактон для чего
Бутират – все о наркотике
Общие сведения
Бутират – медикаментозный препарат из группы антидепрессантов. В рекреационных целях употребляется как наркотическое вещество. Это белый порошок с желтым оттенком, для приема разводится в воде. На рынке представлен оксибутиратом натрия или калия. Соль вызывает психологическую зависимость, медленно уничтожая организм.
Бутират принимают и спортсмены в бодибилдинге, так как вещество способствует повышению концентрации гормона роста. Доказано, что натриевая соль вдвое увеличивает выработку гормона у мужчин, вызывая ускоренный набор мышечной массы.
История создания
Впервые гамма-оксимасляная кислота (ГОМК) была получена синтетическим путем в конце 19-го века русским ученым А. Зайцевым. Способ изготовления был официального опубликован в 30-х годах 20-го века. Исследователи не обращали на новое вещество особого внимания до тех пор, пока ученый Лабори не начал изучение его биологического воздействия. Было обнаружено, что препарат имеет ряд действий, не свойственных для гамма-аминомасляной кислоты. Несколько десятилетий биологи исследовали ГОМК и эффективность ее применения в медицине.
Действие на организм
Оксибутират натрия – психоактивный препарат, его воздействие на организм сравнивается с употреблением алкоголя и Лирики.
Физиологические симптомы
Внимание! Передозировка бутиратом грозит комой и летальным исходом.
Психоэмоциональные проявления
Признаки наркомана
Важно! Уже через 3-4 недели после регулярного употребления наркотика будут заметны указанные симптомы. Токсический эффект со временем усиливается.
Указанные симптомы не свидетельствуют о факте наркомании, но должны заставить задуматься близких людей.
Состав наркотика
Порошок бутират имеет в своем составе натриевую соль гамма-оксимасляной кислоты – это главное действующее вещество.
Вред от наркотика
Максимальная доза оксибутирата натрия для женщин гораздо ниже, чем для мужчин.
Последствия длительного употребления
При употреблении даже низкой дозы наркотика противопоказано вождение автомобиля и управление промышленным оборудованием.
Опасность способов употребления
Наркоманы чаще пользуются первым способом. При введении в вену препарат дает более быстрый эффект. Длительность действия составляет от 1,5 до 3 часов. Оба способа приема вещества опасны.
Передозировка наркотиком
Основные причины
Доврачебная помощь
Медицинская помощь
Далее назначается симптоматическое лечение пострадавших органов и восстановление жизненно важных функций организма.
Последствия отсутствия помощи
Важно! Совмещение бутирата со спиртными напитками и другими веществами, угнетающими ЦНС, многократно повышает риск смерти.
Смертельная доза
Смертельная порция бутирата индивидуальна. Но его токсическое воздействие начинается при употреблении от 2,5 г вещества и более.
Как прекратить действие
Как отойти (антидоты)
Специфического антидота при передозировке бутиратом нет. Отравление – это показание к срочной госпитализации.
Ломка
Через 4 часа после последней дозы бутирата начинается абстинентный синдром. При непродолжительном употреблении вещества наблюдается заторможенность мыслей или, напротив, чрезмерная активность. Также может появиться ощущение тревоги, тяги к наркотику. Через 2-3 часа начинается тремор в конечностях, нарушается координация движений.
Клиническая картина отмены натриевой соли схожа с признаками алкогольного похмелья. Тяжесть симптомов меняется, в зависимости от длительности употребления, дозировок, приема других психотропов и наркотических веществ.
Синдром отмены нужно пережить – после детоксикации организма физиологические симптомы исчезают. Психологическая тяга к наркотику может вызывать апатию, депрессию, мысли о самоубийстве, повышается риск срыва.
Как облегчить синдром отмены
Сколько держится в крови
После попадания в пищевод бутират всасывается кишечником и быстро распространяется по всем органам. Максимальная концентрация натриевой соли в крови наблюдается через 20-40 минут. В этот момент и начинается наркотическое опьянение. Общая длительность действия – не более 3,5 часов. Это зависит от дозировки наркотика и индивидуальных особенностей организма.
Оксибутират разлагается в печени на воду и двуокись углерода. При приеме ГОМК в малой порции – до 1,5 г период полувыведения составит не более 50 минут. Бутират держится в крови до 2 часов. При употреблении дозы более 2,5 г время полувыведения увеличивается. Вещество останется в крови до 3-6 часов.
При длительном употреблении кумуляции не наблюдается. До 80% действующего вещества окисляется до углекислого газа и воды, меньшая доля выводится почками. В крови остаются продукты распада до 16 часов при оральном приеме, до 3 часов после внутривенной инъекции.
Важно! При недостаточности функции печени и алкогольном отравлении способность к метаболизму бутирата натрия снижается, что увеличивает его концентрацию в крови и усиливает токсическое действие.
Сколько держится в моче
Сколько держится в слюне
Следы бутирата в слюне обнаруживаются в течение 2-3 часов после приема наркотика. Однако специальных тестов для обнаружения данного вещества в слюне нет, проверить это можно только в лаборатории.
Сколько держится в волосах
Как ускорить вывод из организма (дома)
Детоксикация в стационаре
Поскольку бутират вымывает калий, магний и другие минералы из организма, необходимо восполнить их дефицит приемом витаминно-минеральных комплексов.
Виды тестов на наркотик
Провести тест на наличие бутирата в организме можно только в специализированной лаборатории. Для анализа используется проба крови или урины.
Для точного установления факта наркотического опьянения с момента приема вещества должно пройти не более 6 часов.
Экспресс-тест
Быстрых аптечных тестов, выявляющих натриевую соль в моче и других биологических жидкостях, пока что нет. Препарат не образует в организме активных продуктов распада, к тому же нет возможности контролировать персональный уровень эндогенного бутирата. Для точных анализов применяются хроматографические способы в комплексе с масс-спектрометрией.
Можно ли обмануть тест
Никакие препараты и народные средства не помогут очистить кровь от ГМОК до ее естественного выведения из организма. Следовательно, если сдавать кровь и мочу в течение 6 часов после приема наркотика, анализ покажет его наличие. Теоретически обмануть лабораторный тест можно разве что подменой образца мочи.
Аналоги и их опасность
Употребление всех указанных аналогов опасно: вызывает привыкание, вредит здоровью, пагубно сказывается на психике.
Как формируется привыкание
Через 2-3 недели орального употребления бутирата начинается привыкание. При внутривенном введении – через 3-5 доз человек становится зависимым. Это проявляется своего рода «запоями», длящимися по 1-2 недели.
Сколько живут наркоманы
Наркоманы, употребляющие бутират регулярно в больших дозах, живут не более 10 лет. Если за этот срок случаются передозировки, то риск преждевременной смерти увеличивается в разы. Лечение устойчивой зависимости усложняется, требует госпитализации.
Реабилитация
Реабилитация – мероприятия, направленные на восстановление физиологических и психологических показателей бывшего наркомана. Проводится после первой стадии лечения зависимости – детоксикации. Помощь должна быть оказана с учетом всех аспектов наркомании, чтобы не только устранить симптомы, причины употребления, но и дать человеку мотивацию для полного отказа от наркотиков.
Следует понимать, что принудительная реабилитация не даст результата, а только приведет к протесту зависимого человека. Процесс лечения должен быть только по добровольному желанию пациента.
Не стоит доверять быстрым реабилитационным программам – они дают кратковременный результат, а затем следуют срывы и новая волна употребления наркотиков. Грамотная реабилитация – процесс комплексный и длительный (от 1 до 6 месяцев), приводящий к абсолютному отказу от вредных привычек и возвращению к полноценной жизни в обществе.
Почему нельзя лечиться в домашних условиях
По указанным причинам часто попытки домашнего лечения зависимости заканчиваются провалом.
Работа с созависимыми
Созависимыми становятся родственники наркомана, когда с головой погружаются в семейную проблему, игнорируя свои личные нужды, интересы. Такое состояние у родственников вызывает иногда больше страданий, чем у самого наркомана, который не оценит этой жертвы.
Амбулаторное лечение
При выраженной абстиненции, наличии сопутствующих патологий и в случаях тяжелой передозировки показано только стационарное лечение.
Ресоциализация
Для восстановления этих качеств предназначена методика ресоциализации. Психологи помогают пациенту усвоить новые принципы, найти ценности в жизни, переключиться на новые правила поведения. После курса бывший наркоман обретает мотивацию, находит новый жизненный путь, адаптируется к жизни в обществе. Занятия проводятся индивидуально и в группах.
Как бросить самостоятельно
Большое значение имеет помощь и поддержка членов семьи. Важно поощрять родственника за каждый успешный день борьбы с зависимостью.
Гамма бутиролактон для чего
Бюро судебно-медицинской экспертизы Ленинградской области
Санкт-Петербургское бюро судебно-медицинской экспертизы, Санкт-Петербург, Россия, 195067
Санкт-Петербургское ГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы», Санкт-Петербург, Россия, 195067
Химико-токсикологическое исследование ГОМК в биообъектах и интерпретация результатов анализа
Журнал: Судебно-медицинская экспертиза. 2018;61(5): 25-30
Лобан И. Е., Горбачева Т. В., Бычков В. А. Химико-токсикологическое исследование ГОМК в биообъектах и интерпретация результатов анализа. Судебно-медицинская экспертиза. 2018;61(5):25-30.
Loban I E, Gorbacheva T V, Bychkov V A. The chemical toxicological investigation of gamma-hydroxybutyric acid in biological objects and the interpretation of the results of the analysis. Sudebno-Meditsinskaya Ekspertisa. 2018;61(5):25-30.
https://doi.org/10.17116/sudmed20186105125
Бюро судебно-медицинской экспертизы Ленинградской области
Предложена методика количественного определения γ-оксимасляной кислоты (ГОМК) в крови, моче и биотканях методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором. Пробоподготовка проводилась методом жидкость-жидкостной экстракции бутилацетатом с последующей дериватизацией проб BSTFA + 1% TMCS. Градуировочные графики линейные в диапазоне концентраций 26,4—1321,6 мг/л. Коэффициент корреляции графиков более 0,999. Предел обнаружения ГОМК в крови, моче и внутренних органах — 10 мг/л. Предел количественного определения — 26 мг/л.
Бюро судебно-медицинской экспертизы Ленинградской области
Санкт-Петербургское бюро судебно-медицинской экспертизы, Санкт-Петербург, Россия, 195067
Санкт-Петербургское ГБУЗ «Бюро судебно-медицинской экспертизы», Санкт-Петербург, Россия, 195067
Натрия оксибутират (натриевая соль γ-оксимасляной кислоты, натриевая соль 4-оксибутановой кислоты, натрия оксибутират, натрия оксибат) — одно из самых интересных и сложных веществ при интерпретации результатов его определения в биологическом материале.
Впервые γ-оксимасляная кислота (ГОМК, 4-оксибутановая кислота) синтезирована в 1874 г. русским химиком-органиком А. Зайцевым [1]. Методика синтеза была опубликована в 1929 г. Это вещество не вызывало у исследователей особого интереса, пока французский фармаколог А. Лабори не занялся изучением его биологической роли. Результатом его исследований стало внедрение натрия оксибутирата в клиническую, а с 1960 г. — в анестезиологическую практику. ГОМК не может проникать через гематоэнцефалический барьер; эту способность ей придает форма натриевой соли [2].
Натрия оксибутират применяется в клинической практике более 50 лет, но представления о точном механизме его действия противоречивы. Предполагают, что основной механизм выключения сознания состоит в блокировании передачи на постсинаптическом уровне в ядрах ретикулярной формации и прямом торможении активности коры головного мозга. Натрия оксибутират оказывает транквилизирующее и снотворное действие. Анальгетические свойства слабые. Засыпание происходит плавно, без стадии возбуждения. Вещество в целом оказывает противосудорожное действие. Натрия оксибутират обладает выраженными системными антигипоксическими, радиопротекторными свойствами, повышает устойчивость к ацидозу и гипотермии. Он стимулирует выделение соматотропного гормона роста, являясь одним из мощнейших на сегодняшний день стимуляторов гипофиза [3]. До начала 90-х годов XX века ГОМК продавалась (в частности, в США) как биологическая добавка для формирования мышечной массы [4].
В Государственный реестр лекарственных средств РФ в настоящее время включена одна лекарственная форма натрия оксибутирата — раствор для внутривенного или внутримышечного введения в концентрации 200 мг/мл. В России натрия оксибутират разрешен для применения в анестезиологии как неингаляционный гипнотик, особенно у пациентов с выраженной эндогенной интоксикацией, гипоксией любой этиологии, и в акушерской практике. Возможно также сочетание с любыми ингаляционными и внутривенными анестетиками. Натрия оксибутират применяется в наркологической практике для лечения алкоголизма, купирования абстинентного синдрома и похмелья. В данном качестве он используется в Италии и Австрии [5, 6].
В Российской Федерации оксибутират (4-гидроксибутират натрия) и другие соли γ-оксимасляной кислоты включены в список психотропных веществ, оборот которых ограничен (Список III Постановления Правительства Р.Ф. № 681 от 30.06.98). Включение натрия оксибутирата в список контролируемых веществ объясняется его немедицинским употреблением наркозависимыми лицами, прежде всего молодежью. На уличном сленге оксибутират натрия известен как «Буратино», «Бутират», «Гомк», «Бутик» и т. д. Действие препарата сравнимо с действием наркотических средств амфетаминового ряда. При употреблении малых доз достигается эффект, подобный слабому алкогольному опьянению. Средние дозы способствуют усилению релаксации, отмечается повышенная чувствительность к музыке, желание танцевать. Высокие дозы препарата вызывают сон [7].
Натрия оксибутират употребляют перорально (пьют) или вводят внутривенно медленно 1—2 мл/мин [7].
Для достижения наркотического эффекта возможно употребление экзогенных прекурсоров ГОМК: γ-бутиролактона (ГБЛ) и 1,4-бутандиола, представляющих собой органические растворители, используемые в различных областях промышленности. Они конвертируются в организме в ГОМК в течение примерно 1 мин [10]. Их фармакологические и поведенческие эффекты на организм определяются ГОМК, которая является целевым аналитом при проведении химико-токсикологических (судебно-химических) исследований.
Токсикокинетика. Натрия оксибутират быстро всасывается после перорального приема, максимум концентрации в крови достигается через 20—40 мин. Связывание с белками плазмы составляет менее 1%. При терапевтических концентрациях период полувыведения 30—50 мин. ГОМК метаболизируется ферментами печени с образованием конечных продуктов диоксида углерода и воды; активных метаболитов ГОМК не образует.
ГОМК является эндогенным продуктом метаболизма, и его следовые количества присутствуют в тканях и жидкостях здоровых людей, не употреблявших ГОМК. По представленным в литературе результатам исследований, эндогенная ГОМК в моче живых лиц составляет 0,5—2 мг/л и в редких случаях больше, но не превышает 5 мг/л; в крови живых лиц от 0,17 до 1,51 мг/л [11, 12]. Наличие эндогенной ГОМК в биологических объектах требует обязательного установления уровня концентрации (cut-off), ниже которой результат определения ГОМК должен считаться эндогенным и не расцениваться как факт приема оксибутирата. В биообъектах от живых лиц количество эндогенной ГОМК в моче выше, чем в крови. Для посмертных объектов наблюдается обратная закономерность — содержание эндогенной ГОМК в крови выше, чем в моче. Следовательно, для анализа прижизненных и посмертных биообъектов должны использоваться разные значения cut-off для ГОМК. Для биообъектов от живых лиц предлагают следующие значения cut-off: для крови — 5 мг/л и для мочи — 10 мг/л [13—15]. На данный уровень cut-off не влияют рН мочи, индекс массы тела, раса [16], пол, курение, прием алкоголя [17], сахарный диабет, беременность [18]. Во всех случаях эндогенная концентрация ГОМК ниже предложенных пороговых значений.
Количество эндогенной ГОМК в посмертных объектах выше, чем в прижизненных. Исследователи из Японии предположили механизм новообразования ГОМК в посмертных объектах из тетраметилдиамина — продукта посмертного распада белка. Молекула амина конвертируется в 4-амино-бутилальдегид с последующим окислением в ГОМК [19]. Для посмертных объектов в литературе предлагаются следующие значения cut-off: для мочи 20 мг/л и для крови 30—50 мг/л [20, 21] (30 мг/л для периферической крови и 50 мг/л для крови из полости сердца) [22]. По данным литературы [23], содержание ГОМК в посмертных объектах увеличивается при хранении объектов в условиях холодильника в течение 4 мес, но все равно не превышает пороговых концентраций 20 мг/л для мочи и 30 мг/л для крови.
R. Baselt [24] приводит следующие данные по дозам оксибутирата натрия: 10 мг/кг вызывает амнезию, 20—30 мг/кг — сон, 50 мг/кг и более — наркоз. При пероральном приеме 25 мг/кг натрия оксибутирата наблюдали содержание ГОМК в крови 80 мг/л через 0,5 ч и 75—90 мг/л через 2 ч. В случае внутривенного введения 50 мг/кг натрия оксибутирата количество ГОМК в крови составляет 170 мг/л через 15 мин. Содержание в крови 360 мг/л ГОМК соответствуют глубокому сну, 156—260 мг/л — управляемому сну, 56—156 мг/л — легкому сну и менее 52 мг/л — пробуждению от сна.
Данные о концентрации ГОМК в крови лиц, употреблявших натрия оксибутират с немедицинской целью, в доступной литературе многочисленны и разнообразны. Это объясняется быстрым выведением ГОМК из крови, различными временны́ми периодами при отборе проб в каждом конкретном случае и дозой принятого натрия оксибутирата. A. Jones и соавт. [25] приводят данные по определению концентрации ГОМК в крови 584 водителей: диапазон концентраций ГОМК составил 8—340 мг/л. По данным другого исследования [26], диапазон концентраций ГОМК составил 80—190 мг/л.
Количество ГОМК в посмертных биологических объектах может достигать очень высоких значений. По данным D. Zvosec и соавт. [27], при анализе 60 смертельных отравлений натрия оксибутиратом концентрация ГОМК составила в среднем 561 мг/л (диапазон от 66 до 4400 мг/л).
D. Lenz и соавт. [28] приводят данные о содержании ГОМК и γ-бутиролактона (ГБЛ) в биообъектах мужчины 38 лет, погибшего от передозировки ГБЛ. Содержание ГОМК составило: 1052 мг/л (сердечная кровь), 932 мг/л (венозная кровь), 711 мг/кг (головной мозг), 1245 мг/кг (легкие), 1080 мг/кг (печень), 1668 мг/кг (почки), 954 мг/л (моча), 2942 мг/кг (желудок), а ГБЛ: 31 и 21 мг/л; 95, 61, 112, 458 мг/кг, 54 мг/л и 9528 мг/кг соответственно.
Наиболее полный обзор аналитических методов определения ГОМК в биологических объектах представлен в работе A. Ingels и соавт. [29]. В зарубежных источниках [30, 31] приводятся данные об успешном использовании энзимных методов обнаружения ГОМК в крови и моче, что значительно облегчает задачи скрининговых анализов биопроб на присутствие ГОМК. Стандартными методами определения ГОМК в биологических объектах остаются методы газовой хроматографии с плазменно-ионизационным и масс-селективными детекторами [32]. Применение газожидкостной и жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией оправдано при анализе так называемых альтернативных объектов: волосы, пятна крови и т. д., в которых содержание ГОМК заведомо низкое. Для скрининговых судебно-химических исследований посмертных биологических жидкостей и биотканей метод газовой хроматографии с одноквадрупольным масс-селективным детектором (ГХ-МС) является адекватным выбором.
Цель исследования — разработка и внедрение в практику работы судебно-химического отделения СПб ГБУЗ БСМЭ методики судебно-химического анализа посмертных биообъектов для определения ГОМК в биологических объектах.
Материал и методы
В экспериментах использовали газовый хроматограф с масс-селективным детектором МАЭСТРО 7820А-5975, оснащенный капиллярной кварцевой колонкой НР-5МS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной пленки 0,25 мкм.
Условия детектирования: энергия электронов ионизации 70 эВ; регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования в интервале масс 40—500 а.е.м.
Управление прибором и сбор данных осуществляли с помощью программного обеспечения MSD ChemStation, обработку результатов и анализ данных — в DataAnalysis и АМDIS.
Режим хроматографирования: скорость газа-носителя 0,8 мл/мин; задержка включения детектора 9 мин после ввода пробы; температура инжектора 280 °C, интерфейса 280 °C, температура колонки программируемая — начальная 60 °C (1 мин), затем нагревание колонки со скоростью 5 °С/мин до 100 °C с выдержкой при конечной температуре 15 мин.
Кроме того, использовали центрифугу Liston C 2201, вибрационный встряхиватель IKA VXR basicVibrax, Вортекс Elmi V-3, бутилацетат марки «Ч», натрия оксибутират раствор для внутривенного и внутримышечного введения 200 мг/мл (ФГУП «Московский эндокринный завод»), тимол марки «для аналитики», BSTFA + TMCS 99:1 (фирмы SUPELCO).
Для разработки методики использовали донорскую кровь и образцы свиной печени.
При пробоподготовке биологических объектов для определения токсикантов учитывали их физико-химические свойства и особенности биологической матрицы.
Результаты и обсуждение
Натрия оксибутират — белый или белый со слабым желтоватым оттенком кристаллический порошок со слабым специфическим запахом, легко растворим в воде, растворим в этаноле. ГОМК — кристаллический порошок, легко растворим в воде. Водные растворы имеют слабощелочную реакцию среды.
По данным литературы [33—36], изолирование ГОМК из биообъектов можно проводить методами жидкость-жидкостной экстракции — ЖЖЭ (экстрагенты — этилацетат, ацетон, ацетонитрил) и твердофазной экстракции — ТФЭ. ЖЖЭ — самый распространенный метод экстракции токсикантов из биообъектов при проведении судебно-химических исследований, так как позволяет экстрагировать широкий спектр токсикантов и имеет значительно более низкую стоимость по сравнению с методами ТФЭ. Особенностью ГОМК и натрия оксибутирата является их высокая растворимость в воде и органических растворителях. При проведении пробоподготовки биообъектов для определения ГОМК необходимо учитывать, что при рН 3 ), чем ацетонитрил (10 мг/м 3 ), хлороформ (5 мг/м 3 ), и, следовательно, более низкую токсичность, что важно для обеспечения наиболее безопасных условий труда в лаборатории при производстве большого объема скрининговых исследований.
Анализ биологических объектов имеет смысл только при определении количественного содержания ГОМК. В связи с этим в пробу в процессе пробоподготовки сразу добавляют внутренний стандарт (тимол). В данном качестве (для количественного определения ГОМК) он отвечает всем основным требованиям, предъявляемым к внутреннему стандарту:
1) не является эндогенным веществом и не содержится в биологических пробах (случаи определения тимола в биопробах исключительные);
2) имеет близкие физико-химические свойства к целевому аналиту (изолируется из биоматериала по той же методике, что и аналит);
3) подвергается дериватизации (определение ГОМК методом хромато-масс-спектрометрии возможно только в виде дериватов из-за высокой полярности соединения);
4) имеет близкие хроматографические свойства (относительно близкое время удерживания на хроматографических колонках);
5) устойчив в виде растворов.
Пробоподготовка крови и мочи: флакон с кровью (мочой) встряхивали на Вортексе до достижения гомогенности (данная стадия пробоподготовки обязательная, так как концентрация ГОМК в сыворотке крови выше, чем в цельной крови). Это объясняется хорошей растворимостью ГОМК в крови и, следовательно, более высокой концентрацией ГОМК в биообъектах с большим содержанием воды. Соотношение концентраций ГОМК сыворотка/кровь 1,23:1 [37].
Механическим дозатором отбирали 1 мл крови (мочи) и помещали в центрифужную стеклянную пробирку. К пробам крови добавляли 300 мкл воды и встряхивали на Вортексе в течение 3 с, посмертная кровь может содержать меньшее количество воды; добавление воды в пробу позволяет получить более жидкую пробу, что повышает эффективность экстракции ГОМК. Затем добавляли 50 мкл раствора тимола в бутилацетате в концентрации 41,6 нг/мкл. Встряхивали на Вортексе в течение 3 с. Экстрагировали 250 мкл бутилацетата с использованием встряхивателя VXRbasicVibrax в течение 10 мин при 1000 об/мин. Центрифугировали при 3500 об/мин в течение 10 мин. Верхний слой органического растворителя в количестве 100 мкл отбирали дозатором и переносили в виалу для автосамплера. Добавляли 100 мкл BSTFA + 1% TMCS. Виалу закрывали, термостатирвали 30 мин при температуре 80 °C. После охлаждения пробу анализировали методом хромато-масс-спектрометрии.
Пробоподготовка биотканей: 3 г биоткани мелко измельчали, перемешивали, отбирали навеску 1 г в стеклянную пробирку. Заливали 1 мл очищенной воды, встряхивали на Вортексе при 2000 об/мин в течение 3 с. Экстрагировали с использованием встряхивателя VXRbasicVibrax в течение 10 мин. Водный слой (0,5 мл) отбирали дозатором в стеклянную центрифужную пробирку, добавляли 50 мкл раствора тимола в бутилацетате в концентрации 41,6 нг/мкл. Встряхивали на Вортексе в течение 3 с. Экстрагировали 250 мкл бутилацетата с использованием встряхивателя VXRbasicVibrax в течение 10 мин при 1000 об/мин. Центрифугировали при 3500 об/мин 10 мин. Верхний слой органического растворителя в количестве 100 мкл отбирали дозатором и переносили в виалу для автосамплера. Добавляли 100 мкл BSTFA+1% TMCS. Виалу закрывали, термостатировали 30 мин при температуре 80 °C. После охлаждения пробу анализировали методом хромато-масс-спектрометрии.
Идентификацию ГОМК проводили в виде 2TMS-4-оксибутановой кислоты по времени удерживания и соответствию библиотечному масс-спектру. Масс-спектр 2ТМС-4-оксибутановой кислоты: 147 999; 73 544; 75 249; 117 235; 233 179; 148 162; 45 138; 14 989; 4178; 14 370. Масс-спектр ТМС-тимола: 207 999; 73 852; 222 265; 208 196; 45 156; 91 100; 7587; 7481; 4078; 9667. Масс-спектры 2ТМС-4-оксибутановой кислоты и ТМС-тимола имеются в библиотеках NIST, Willey. Время удерживания 2TMS-4-оксибутановой кислоты 17,050. Время удерживания ТМС- тимола 23,438.
Определенные сложности при идентификации ГОМК в моче представляет эндогенное вещество — мочевина. Мочевина экстрагируется из мочи в процессе ЖЖЭ и образует 2ТМС-мочевину при проведении дериватизации проб. Масс-спектр 2ТМС-мочевины: 147 999; 186 630; 73 300; 74 180; 148 170; 75 150; 190 120; 146 110; 4590; 6690. У 2ТМС-мочевины и 2ТМС-4-оксибутановой кислоты одинаковый характеристический ион — m/z 147. В случае неразделения пиков 2ТМС-мочевины и 2-ТМС-4-оксибутановой кислоты при хроматографической разгонке одинаковый характеристический ион будет искажать результат количественного определения 4-оксибутановой кислоты. На рисунке Хроматограмма определения 4-оксибутановой кислоты в пробе мочи в присутствии мочевины с помощью ГХ-МС. представлена хроматограмма определения 4-оксибутановой кислоты в пробе мочи в присутствии мочевины методом ГХ-МС. Время удерживания 2ТМС-мочевины 17,719 мин и 2ТМС-оксибутановой кислоты 17,050 мин. В предложенных условиях хроматографирования мочевина не влияет на идентификацию и количественное определение 4-оксибутановой кислоты.
Для количественного определения (путь построения градуировочных графиков) использовали кровь, мочу, печень, заведомо не содержащие ГОМК (контроль проводился методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором). К пробам крови, мочи и печени добавляли раствор оксибутирата в воде. Диапазон концентраций 26,4—1321,6 мг/л. Пробоподготовку проводили, как описано ранее для крови, мочи и внутренних органов. Градуировочный график строили по 7 точкам, соответствующим концентрации оксибутирата в крови, моче и внутренних органах: 26,4; 66,3; 132,16; 264,32; 330,4; 660,8 и 1321,6 мг/л. При расчетах концентраций для построения градуировочного графика использовали коэффициент пересчета натрия оксибутирата в 4-оксибутановую кислоту (0,826). Содержание оксибутирата в биологических объектах определяли методом внутреннего стандарта. Внутренний стандарт — раствор тимола в бутилацетате в концентрации 41,6 нг/мкл.
Метрологические характеристики. Предел обнаружения ГОМК в крови, моче и внутренних органах 10 мг/л, предел количественного определения 26 мг/л. Коэффициент корреляции графиков более 0,999. Среднее квадратичное отклонение 13,1. Относительное стандартное отклонение 4,4% (для концентрации ГОМК 330,4 мг/л).
Заключение
1. Определение ГОМК в биологических объектах — актуальная задача современной аналитической токсикологии.
2. Предложенная методика количественного определения ГОМК основана на методе хромато-масс-спектрометрии, являющемся в настоящее время основным методом идентификации токсикантов при производстве судебно-химических исследований; она предназначена для широкого круга лабораторий.
3. Методика пробоподготовки биологических объектов позволяет проводить скрининговые анализы биопроб в достаточно большом объеме, а малые объемы используемых реактивов снижают материальные затраты на производство исследований.
4. В связи с быстрым выведением ГОМК из крови для установления факта употребления натрия оксибутирата необходимо анализировать несколько биологических объектов (моча живых лиц, биоткани при смертельных исходах), особенно в случаях длительного (несколько часов) интервала между предполагаемым приемом вещества и временем отбора проб.
5. Судебно-химические (химико-токсикологические) исследования для определения ГОМК необходимо проводить с количественной оценкой содержания ГОМК в биоматериале.
6. Определение ГОМК в биологических объектах может свидетельствовать о приеме не только натрия оксибутирата, но и γ-бутиролактона и 1,4-бутандиола.
7. При интерпретации результатов судебно-химических (химико-токсикологических) исследований следует учитывать эндогенные концентрации ГОМК в прижизненных и посмертных объектах.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.